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    解決方案

    在生命科學領域中致力于引進、推廣國外先進技術與產品

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    H1N1流感病毒檢測整體解決方案

    病毒RNA樣品提取

    Real-time RT-PCR實驗的第一步是獲得純凈的RNA樣品,檢測H1N1病毒的呼吸道樣本包括支氣管肺泡灌洗液、氣管抽吸物、痰、鼻咽或口咽洗液或拭子。而在流行病爆發時,能夠對大批樣品進行快速而安全的提取非常重要。ThermoFisher公司的KingFisher系列自動化磁珠提取純化儀器,聯合Ambion等公司的病毒RNA磁珠提取試劑盒,可以用于從多種來源的樣本中,如血清、血漿、口腔拭子和細胞培養液中,提取病毒RNA。該系統不需有機溶劑或RNA沉淀步驟,消除了基于濾膜的方法經常碰到的問題,如濾膜堵塞、大的洗脫體積和不穩定的產率。KingFisher可以讓操作人員免去很多繁瑣的手工操作,并且遠離病毒及有毒試劑的危害。而結合后續的實時定量RT-PCR,可儀檢測到低至10拷貝的病毒RNA,可極大提高H1N1亞型豬流感病毒檢測的靈敏度。


      此技術經過美國國家獸醫服務實驗室(NVSL)驗證,是美國農業部認可的禽流感檢測的分子生物學方法。目前,日本的國立傳染病研究所剛剛購買了4臺新推出的Kingfisher Flex,應用于流感病毒RNA的純化。韓國的Catholic University 也剛剛采購了Kingfisher mL用于病毒RNA的應用。越南的Kingfisher安裝在世衛組織(WHO)的實驗室。中國農業部獸醫診斷中心、哈獸研動物流感參考實驗室、北京出入境檢驗檢疫局 等單位,以及澳大利亞和新西蘭的Kingfisher系統也主要應用于這方面的工作。


    Kingfisher磁珠純化家族

    KingFisher FlexKingFisher FlexKingFisher Flex mL
    處理體積96:20-1000μl
    24:200-5000μl
    2415
    磁珠回收效率>95%>99%>95%
    處理體積96:20-1000μl
    24:200-5000μl
    2415
    磁珠回收效率>95%>99%>95%
    處理體積96:20-1000μl
    24:200-5000μl
    2415
    磁珠回收效率>95%>99%>95%


    Real-time RT-PCR檢測

    Real-time RT-PCR是目前最快速最靈敏的病毒檢測方法之一,也是《甲型H1N1流感病毒實驗室檢測方法》中推薦使用的方法。Real-time RT-PCR檢測豬流感的方案是用一組寡聚核苷酸引物和Taqman探針,對呼吸道樣本或體外培養的豬流感病毒進行檢測鑒定。InfA引物和探針為檢測出甲型流感病毒而設計,swInfA引物和探針可特異性地檢測出所有的豬甲型流感病毒,swH1引物和探針可特異性檢測豬流感病毒H1亞型。因為實驗材料是RNA,所以推薦使用一步法反轉錄熒光定量PCR試劑盒。

      美國Bio-Rad作為全球分子生物學實驗室設備領域的領先者,對于流行病致病菌和病毒的檢測一直非常關注。美國CDC/WHO 關于豬流感檢測的文獻和操作方法中,使用了Bio-Rad的一步法熒光定量PCR試劑盒iScript One-Step RT-PCR Kit,及Bio-Rad的熒光定量PCR儀。

      美國Bio-Rad的CFX96 實時定量PCR儀,能夠為使用者提供可靠的溫度控制特性、最先進的光學檢測技術和功能強大的軟件控制及數據分析能力,能夠得到精確的定量結果,準確區分目標基因。為研究者提供最佳的實時定量PCR結果。


    《甲型H1N1流感病毒實驗室檢測方法》中要求樣品處理要在生物安全實驗室完成。生物安全實驗室需要配備相應的生物安全柜對實驗室環境、操作人員及樣品進行保護。美國熱電 Thermo Fisher旗下的 A2/B2型生物安全柜是世界上最好的生物安全柜,在國際上享有很好的盛譽。美國熱電的生物安全柜(包括部分棑和全棑)都,達到Class 2等級,工作區氣流潔凈度達100級。此外,同屬Thermo Fisher旗下的Forma系列-80℃超低溫冰箱能夠為樣品提供最好的保存環境與保護,Forma系列液氮罐更可以用于有生物危險性的樣品的運輸。
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